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这种方法与传统的向上转移相比更快捷

 凝胶中的DNA先用弱酸(引起部分脱嘌呤作用)后用强碱(水解脱嘌呤部位的磷酸二酯主链)处理。产生的DNA片段(约lkb)可以快速高效地从凝胶上转移。

  然而,硝酸纤维素膜重要的是要防止过强的脱嘌呤作用,否则DNA断裂成过小的片段,不能有效地结合到固相支持物上。脱嘌呤及水解作用亦可导致在最后的放射自显影片上出现条带模糊的现象,这可能是在转移过程中由于DNA扩散程度加重引起的。

  因此建议只有预知靶DNA片段长度大于15kb时,才进行脱嘌呤及水解处理。图2-2向上毛细管转移法转移琼脂糖凝胶中的DNA。

  从储液池中吸出的缓冲液流经凝胶至一叠纸巾中。DNA随液流从凝胶上洗脱下来,并沉积在硝酸纤维素膜或尼龙膜上。纸巾上面的重物保证了转移系统中各层之间的紧密连接。

  在向下毛细管转移法中, DNA片段由向下的碱性缓冲液液流携带转移并聚集于带电荷的尼龙膜表面。为实现向下的转移,有各种不同的储液池、纱布层排列,以及各种不同的转移缓冲液配方(参阅Lichtenstein et al.1990; Chomczynski 1992)。

  我们目前的最优方案是采用0.4mol/LNaOH溶液以及--套可以使转移缓冲液从储液池,经过纱布层流向凝胶上部,并进而借助凝胶下层纸巾的作用而使转移缓冲液通过凝胶的装置。

  这种方法与传统的向上转移相比更快捷,并且信号强度提高约30%。这种改进可能是由于凝胶上没有了顶部重物的压力从而使DNA片段更容易通过凝胶中的小空隙。
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作者: 小小的我们

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